الاستقرار الانفصالي للبلازميد عالي النسخ pUC19 في بكتيريا Escherichia coli Trans10 أثناء التمرير المتسلسل
الكلمات المفتاحية:
استقرار البلازميد، بلازميد عالي النسخ، التمرير المتسلسلالملخص
يُعدّ استقرار البلازميدات جانبًا مهمًا في تقنيات الاستنساخ الجزيئي والحمض النووي المعاد التركيب، إذ يؤثر مباشرة في موثوقية وقابلية تكرار التجارب المعتمدة على البلازميدات. في هذه الدراسة، تم فحص استقرار البلازميد عالي النسخ pUC19 في بكتيريا Escherichia coli Trans10 خلال سبعة أيام متتالية من التمرير المتسلسل المستمر في ظروف انتقائية (بوجود الأمبيسيلين) وغير انتقائية. بعد التحويل الكيميائي بطريقة الصدمة الحرارية باستخدام CaCl₂، جرى استزراع 100 مستعمرة عشوائية يوميًا، وأكّد طول مدة التجربة المحافظة على البلازميد. أظهرت جميع المستعمرات نتيجة إيجابية لوجود بلازميد pUC19 بغضّ النظر عن وجود المضاد الحيوي. تشير هذه النتائج إلى أن تضاعف النسخ المتعدد لبلازميد pUC19 إلى جانب الخلفية الوراثية لبكتيريا E. coli Trans10 يُعدّ موثوقًا في ضمان توريث البلازميد عبر عدة أجيال. وقد برهنت هذه الدراسة على استقرار pUC19 بوصفه ناقل استنساخ في سلالة Trans10، وقدّمت دليلًا على أن المحافظة القوية على البلازميد تتحقق حتى في غياب الانتقاء المستمر بالمضاد الحيوي، مما يبرر فائدته في تجارب البيولوجيا الجزيئية الأساسية.
المراجع
M. Levisson, R. B. Spruijt, I. N. Winkel, S. W. M. Kengen, J. Van Der Oost, and H. Schlüter, Molecular biotechnology : principles and applications of recombinant DNA. 2010. [Online]. Available: https://www.ptonline.com/articles/how-to-get-better-mfi-results
L. Snyder, T. M. Henkin, J. E. Peters, and W. Champness, Molecular Genetics of Bacteria, 4th Edition, vol. 1. 2013. doi: 10.1128/9781555817169.
“Segregational Instability of pUBl1 O-Derived Recombinant,” vol. 244, pp. 235–244, 1985.
K. Friehs, “Plasmid copy number and plasmid stability.,” Adv. Biochem. Eng. Biotechnol., vol. 86, pp. 47–82, 2004, doi: 10.1007/b12440.
L. Sevillano, M. Díaz, and R. I. Santamaría, “Stable expression plasmids for Streptomyces based on a toxin-antitoxin system,” pp. 1–10, 2013.
S. Aboualkasem, D. S. Retnoningrum, A. Refiani, and C. Riani, “Separate Toxin-Antidote Stabilization System in Two Plasmids for Recombinant Protein Production,” Curr. Pharm. Biotechnol., vol. 19, Feb. 2018, doi: 10.2174/1389201019666180226154342.
G. Vandermeulen, C. Marie, D. Scherman, and V. Préat, “New generation of plasmid backbones devoid of antibiotic resistance marker for gene therapy trials.,” Mol. Ther., vol. 19, no. 11, pp. 1942–9, 2011, doi: 10.1038/mt.2011.182.
S. Lin‐Chao, W. ‐T Chen, and T. ‐T Wong, “High copy number of the pUC plasmid results from a Rom/Rop‐suppressible point mutation in RNA II,” Mol. Microbiol., vol. 6, no. 22, pp. 3385–3393, Nov. 1992, doi: 10.1111/J.1365-2958.1992.TB02206.X;WGROUP:STRING:PUBLICATION.
A. D. A. C. M. Peijnenburg, S. Bron, and G. Venema, “Structural Plasmid Instability in Recombination- and Repair-Deficient Strains of Bacillus subtilis,” 1987.
M. Genes, “Guidance for Industry Use of Antibiotic Resistance,” 1997.
M. S. Standley, S. Million-Weaver, D. L. Alexander, S. Hu, and M. Camps, “Genetic control of ColE1 plasmid stability that is independent of plasmid copy number regulation,” Curr. Genet., vol. 65, no. 1, p. 179, Feb. 2018, doi: 10.1007/S00294-018-0858-0.
Y. C. Liao, B. Saengsawang, J. W. Chen, X. Z. Zhuo, and S. Y. Li, “Construction of an Antibiotic-Free Vector and its Application in the Metabolic Engineering of Escherichia Coli for Polyhydroxybutyrate Production,” Front. Bioeng. Biotechnol., vol. 10, p. 837944, Jun. 2022, doi: 10.3389/FBIOE.2022.837944/BIBTEX.
T. Wein, N. F. Hülter, I. Mizrahi, and T. Dagan, “Emergence of plasmid stability under non-selective conditions maintains antibiotic resistance,” Nat. Commun., vol. 10, no. 1, Dec. 2019, doi: 10.1038/S41467-019-10600-7.
